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    深入探討高壓制備色譜

    更新時(shí)間:2016-09-25      點(diǎn)擊次數(shù):1876
       制備色譜是指采用色譜技術(shù)制備純物質(zhì),即分離、收集一種或多種色譜純物質(zhì)。那么高壓制備色譜是怎樣的一個(gè)過程,其目的是什么,這些都是本文將要探討的內(nèi)容。

      分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們?cè)诜治錾V上取得了良好的分離效果時(shí),可以將其放大,應(yīng)用到制備色譜上,由此,我們需要考慮調(diào)整上樣量,流速,梯度:

      1.上樣量的調(diào)整:它與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān):具體關(guān)系時(shí);制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備豬場/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方;

      2.流速的調(diào)整:制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方;

      3.梯度的調(diào)整:制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析。

      高壓制備色譜中的“制備”這一概念指獲得足夠量的單一化合物,以滿足研究和其它用途。高壓制備色譜的出現(xiàn),使色譜技術(shù)與經(jīng)濟(jì)利益建立了。制備量大小和成本高低是制備色譜的兩個(gè)重要指標(biāo)。其中,氣相制備色譜主要用于石油化工產(chǎn)品和揮發(fā)性天然產(chǎn)物的色譜純樣品制備。

      一、高壓制備色譜到底是什么?

      分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率,制備色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來說。制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。

      二、固定相的選擇

      硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果,如,對(duì)硅膠進(jìn)行的硝酸銀(或緩沖液)處理。

      三、樣品的前處理

      高壓制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

      四、裝柱方法的選擇

      根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸,采用不同的裝柱方法,往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大,顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度。

      1.濕法裝填:一般來說,顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。

      2.敲擊-裝填:所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。

      3.濕法:濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。

      然而,當(dāng)柱直徑大于20mm,所加壓力為30-40bar時(shí),高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜,為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,可采用柱長壓縮技術(shù)。這種方法,先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。 濕法裝柱需要一定的設(shè)備,在柱子填完后,應(yīng)用有柱效的測(cè)量,對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。

      五、產(chǎn)品的收集

      手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力,自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。

      六、超載、邊緣切割、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用

      在高壓制備色譜中,因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度,可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時(shí)候,也有一些分析色譜的時(shí)候,不能用到的技巧。

      七、柱轉(zhuǎn)換技術(shù)

      通過接頭或者閥門,實(shí)現(xiàn)柱子的簡單延長,或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)(或幾個(gè))組分的精制。

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